产品及特点

本产品是根据探针法荧光定量PCR原理开发的检测试剂盒，专为生物医疗领域设计，具有以下特点：

1. 即开即用

用户只需提供样品DNA模板，无需额外准备，操作简便。

2. 高灵敏度

引物及其他组分经过优化，确保高灵敏度，能够准确检测样品中的目标DNA。

3. 阳性对照

本产品提供阳性对照，能够有效区分假阴性样品，提升检测的可靠性。

4. 高特异性

引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区，避免与其他生物样本DNA的交叉反应。

5. 多功能检测

本试剂盒不仅可用于定性检测，也可进行定量检测，线性范围至少覆盖5个数量级，满足不同检测需求。

6. 充足的反应次数

本产品足够进行50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应，经济实用。

7. 仅限科研使用

明确标注本产品仅适用于科研用途，确保使用合规。

使用方法

一、DNA提取

使用自选方法提取并纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品

（注意：由于阳性对照浓度高，下列稀释操作需在独立区域进行，避免交叉污染）

1. 标记6个离心管，分别为7、6、5、4、3、2。
2. 每个管中加入45μL DEPC-H2O，建议使用带芯枪头。
3. 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品，放冰上待用。
4. 重复此步骤，逐步稀释，直到得到6个不同稀释度的标准曲线样品，放冰待用。

如无需制作标准曲线，可将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL。

三、试剂配制

根据待检样品数量，准备相应数量的qPCR管（N个待检样品 + 1个阴性对照 + 6个阳性对照），向各PCR管中加入相应成分，具体方法见详细说明书。

四、添加模板

向qPCR管中分别加入2μL模板，顺序为负对照（DEPC-H2O）、待测样品模板、阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

五、扩增反应

将PCR管放置于PCR扩增仪的样品槽中，按照规定程序进行扩增，详情见说明书。

六、结果分析

1. 如制作标准曲线，根据阳性对照浓度的log值与Ct值绘制标准曲线，推算待测样品的DNA浓度。
2. 若未制作标准曲线，按以下标准判定结果：阳性对照Ct值<30呈S型曲线；阴性对照Ct值38或无Ct值；样本结果Ct值<35为阳性，Ct值在35-38范围内需复检。

储存及运输

请在低温条件下运输，储存于-20℃，有效期为一年。尊龙凯时品牌的阳性对照需单独存放，避免污染其他试剂。